Y1HGold Chemically Competent Cell  

酵母菌化學感受態細胞

溫馨提示

見我司（懋康生物）整理的酵母雙雜交（Yeast two-hybrid assay）產品專題。

產品關鍵詞：

GAL4-AbA酵母單雜交系統；Y1HGold；pAbAi；pGADT7；Ar Qual；X-α-Gal ；Aureobasidin A （AbA）；金擔子素；

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產品描述

酵母單雜交是在酵母雙雜交的基礎上發展起來，不同于雙雜交用來研究蛋白-蛋白間的相互作用，單雜交主要用于研究蛋白和DNA的相互作用。

Y1HGold是Clontech GAL4-AbA酵母單雜交系統用的菌株，MATα型，能直接轉化質粒進行文庫篩選。

Y1HGold-GAL4酵母單雜交系統需要兩種質粒配套使用，分別為pAbAi和pGADT7。前者篩選標志為Ura，用于表達pBait-AbAi構建子（通過將bait-DNA 單拷貝或串聯重復序列克隆到pAbAi載體所得）；后者篩選標志為Leu，用于表達GAL4 AD與誘捕蛋白（prey）的融合蛋白。Y1HGold-GAL4酵母單雜交系統的工作原理在于：基因組整合有pBait-AbAi的酵母報告菌株，當誘捕蛋白（prey）結合到誘餌序列（bait-DNA），GAL4 AD會激活AUR1-C報告基因的表達，這一表達使得細胞能夠在含篩選抗生素金擔子素（Aureobasidin A，AbA）的培養基上生長。與傳統的營養缺陷報告基因相比，AUR1-C（AbA^r）在很低濃度（100-200 ng/ml）下即可以有效殺死非抗性克隆，大大降低背景克隆生長。這一優勢也可降低酵母單雜交假陽性發生的概率。

本品為經特殊工藝制備的Y1HGold酵母菌化學感受態細胞，用pGADT7質粒檢測轉化效率＞10⁴cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存三個月。

基因型

MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1

使用方法

1. 取100 µl冰上融化的Y1HGold化學感受態細胞，依次加入預冷的目的質粒2-5 µg，Carrier DNA （95-100℃ 孵育5 min，快速冰浴。重復一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用槍吹打幾次充分混勻，30℃水浴30 min（在15min時翻轉6-8次混勻）。

2. 之后將管子放42℃水浴15 min（在7.5min時翻轉6-8次混勻）。

3. 5000 rpm離心40s棄上清，用400 µl ddH₂O重懸沉淀，離心30s棄上清。

4. 用50 µl ddH₂O重懸，涂板，放入恒溫培養箱29℃培養48-96 h。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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Y1HGold酵母化學感受態細胞

Y1HGold酵母化學感受態細胞