Enhanced BCA Protein Quantification Kit

BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（增強(qiáng)型）

產(chǎn)品關(guān)鍵詞：

BSA 牛血清白蛋白；BCA蛋白定量試劑盒；Bradford蛋白定量；Coomassie Brilliant Blue G250 考馬斯亮藍(lán)G250；CAS NO：979-88-4；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

BCA法是目前應(yīng)用比較廣泛的蛋白濃度測(cè)定方法。基于雙縮脲反應(yīng)，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)將Cu²⁺還原成Cu⁺，產(chǎn)生一種紫藍(lán)色復(fù)合物，在562nm處有高的吸光值，該反應(yīng)產(chǎn)物的量與蛋白濃度成正比。BCA蛋白濃度測(cè)定法實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測(cè)定的簡(jiǎn)便、靈敏、快速、穩(wěn)定和高兼容性。

BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（增強(qiáng)型）與傳統(tǒng)方法比較，具備以下特點(diǎn)：1）靈敏度更高，小檢測(cè)蛋白量達(dá)到0.2μg，檢測(cè)濃度下限達(dá)到10μg/ml；2）速度快，比一般的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒顯色所用時(shí)間短。3）現(xiàn)性范圍寬，20-1000μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系；4）不受絕大部分樣品中化學(xué)物質(zhì)的影響，對(duì)于 5%以內(nèi)的SDS，Triton X-100，Tween 20、60、80具有很好的兼容性。但BCA法受螯合劑和略高濃度的還原劑影響，需確保樣品中EDTA＜10mM，DTT＜1mM，β-ME＜0.01%，以及不含EGTA。

我司提供三種規(guī)格的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（增強(qiáng)型），酶標(biāo)法分別可做500T，2500T和5000T。

產(chǎn)品組分

使用方法

1.       蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備

2.       BCA工作液的配制

根據(jù)樣品數(shù)量，按試劑（A）:試劑（B）=50:1的比例配制BCA工作液，即取50份BCA試劑A和1份BCA試劑B， 充分混勻，即獲得BCA工作液。例如取5ml BCA試劑A和0.1ml BCA試劑B，配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液室溫24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

3.       蛋白濃度的測(cè)定

注意事項(xiàng)

1）   蛋白標(biāo)準(zhǔn)BSA粉末溶解于蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液后，即獲得蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液，該原液中含有防腐劑，不影響后續(xù)檢測(cè)，該蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液應(yīng)放在-20℃長(zhǎng)期保存。

2）   待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否則待測(cè)蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)所含非蛋白成分不*，有可能導(dǎo)致測(cè)定不準(zhǔn)確。

3）   待測(cè)蛋白和蛋白標(biāo)準(zhǔn)加入BCA工作液后，如果發(fā)現(xiàn)檢測(cè)效果不佳，可以室溫放置2h或60℃放置30min，顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深。顯色反應(yīng)也會(huì)隨溫度升高而加快。如果濃度較低，可以適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間或在較高溫度下孵育。

4）   測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒(méi)有明顯變化，可能的原因是樣品中含有嚴(yán)重干擾BCA法測(cè)定蛋白濃度的物質(zhì)（詳見(jiàn)資料-BCA法的兼容性）。

5）   建議每次測(cè)定都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因?yàn)?/span>BCA法測(cè)定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時(shí)間和溫度，否則如需精確測(cè)定宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

6）   如果沒(méi)有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的小檢測(cè)體積。應(yīng)按比例適當(dāng)加大BCA工作液的用量使總體積不小于小檢測(cè)體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量亦相應(yīng)按比例放大。

7）   為了加快BCA法測(cè)定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)加熱，但是切勿過(guò)熱，否則易失效。

8）   BCA法檢測(cè)樣本中不應(yīng)含有EGTA，否則影響檢測(cè)結(jié)果。

9）   為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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