BL21系列感受態(tài)細(xì)胞常見(jiàn)問(wèn)題
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Part 1、BL21/BL21（DE3）/ BL21 (DE3) pLysS感受態(tài)細(xì)胞
一、BL21/BL21（DE3）/BL21 (DE3) pLysS菌株和基因型
宿主菌Host Strain | 基因型Genotype |
BL21 strain | E. coli B F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm |
BL21 (DE3) strain | E. coli B F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3) |
BL21 (DE3) pLysS strain | E. coli B F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3) pLysS (CamR) |
基因型說(shuō)明：
a）以上三個(gè)宿主菌都是大腸桿菌E. Coli. B/r菌株，不含lon蛋白酶，也缺乏外膜蛋白酶OmpT。這兩個(gè)關(guān)鍵蛋白酶的缺乏降低菌株內(nèi)表達(dá)外源蛋白的降解率。
b）DE3命名表明該菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體（DE3 lysogen）（其上攜帶lacUV5啟動(dòng)子調(diào)控的T7 RNA聚合酶基因），IPTG能誘導(dǎo)T7 RNA聚合酶的表達(dá)。
c）pLysS命名表明該菌株攜帶pLysS質(zhì)粒，含有表達(dá)T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能夠作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，從而能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)。pLysS質(zhì)粒賦予菌株氯霉素抗性（CamR），而且含有p1復(fù)制起始子，這一起始子使該菌株兼容于含ColE1或pMB1復(fù)制起始子的質(zhì)粒（比如pUC或pBR322來(lái)源的質(zhì)粒）。
二、BL21/BL21（DE3）/BL21 (DE3) pLysS菌株的應(yīng)用特征
BL21/BL21（DE3）/BL21 (DE3) pLysS三種宿主菌內(nèi)T7啟動(dòng)子表達(dá)載體（比如pCAL, pET載體）呈現(xiàn)不同的蛋白表達(dá)水平。BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞是型菌株，滿足高水平蛋白表達(dá)且容易誘導(dǎo)。BL21 (DE3) pLysS感受態(tài)更嚴(yán)格控制毒性蛋白表達(dá)且具氯霉素抗性。
表達(dá)宿主 | 誘導(dǎo)方法 | 優(yōu)點(diǎn) | 缺點(diǎn) |
BL21 | λ噬菌體CE6感染 | zui嚴(yán)格控制背景表達(dá)（非誘導(dǎo)表達(dá)） | 誘導(dǎo)不如DE3衍生菌有效；誘導(dǎo)（感染）過(guò)程更冗長(zhǎng) |
BL21 (DE3) | IPTG誘導(dǎo)lacUV5啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的T7聚合酶 | 高水平表達(dá) | T7聚合酶泄露表達(dá)，引起潛在毒性蛋白的背景表達(dá)（非誘導(dǎo)表達(dá)） |
BL21 (DE3) pLysS | IPTG誘導(dǎo)的T7聚合酶 | 容易誘導(dǎo) | 與BL21 (DE3)相比，稍微抑制誘導(dǎo)表達(dá) |
三、BL21/BL21（DE3）/BL21 (DE3) pLysS菌株的異源蛋白表達(dá)特征
表達(dá)宿主 | 異源蛋白（Heterologous protein）表達(dá)特征 |
BL21 strain | 非毒性蛋白的高水平表達(dá)，不能用于T7啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的蛋白表達(dá)（如pET） |
BL21 (DE3) strain | 非毒性蛋白的高水平表達(dá)，用于T7啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的蛋白表達(dá)（如pET） |
BL21 (DE3) pLysS strain | 非毒性和毒性蛋白的高水平表達(dá)，背景表達(dá)低于BL21 (DE3)，BL21 |
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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
MF2331-1000UL | BL21 (DE3) Chemically Competent Cell 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl | 280 |
MF2331-5000UL | BL21 (DE3) Chemically Competent Cell 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 50×100μl | 1280 |
MF2332-1000UL | BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl | 280 |
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