www.黄色-在线日韩av-天天色影院-色呦-国产精品18p-大片免费在线观看视频-91鲁-久久天天躁狠狠躁夜夜躁2014-欧美日韩成人一区二区三区-男女无遮挡做爰猛烈视频-亚洲女人天堂网-久久久久国产精品夜夜夜夜夜-在线观看欧美精品-日本xxxx裸体xxxx-中文字幕乱码无码人妻系列蜜桃-女人做爰全过程免费观看美女-一区二区小说-日本成人性爱-制服诱惑一区二区三区-中文字幕久久av-六月激情综合网-中文字幕日韩免费-久久久精品免费看-污污视频网站免费观看-99国产超薄肉色丝袜交足

歡迎光臨上海懋康生物科技有限公司
主頁 > 技術文章 > 了解一下聚凝胺的使用步驟吧
技術文章
了解一下聚凝胺的使用步驟吧
  聚凝胺是一種多聚陽離子聚合物,常用于哺乳動物細胞的DNA轉染實驗以增強脂質體的轉染效率。Polybrene目前廣泛用于逆轉錄病毒介導的基因轉染,慢病毒介導的基因轉染,作用機理可能是通過中和細胞表面唾液酸與病毒顆粒之間的靜電排斥從而促進吸附作用。Polybrene也是一種有名的抗肝素劑(肝素拮抗劑),常用來生產非特異性凝集的紅細胞。
 
  另外Polybrene也多用于蛋白測序,因為小劑量的Polybrene在自動測序分析可明顯改善多肽的降解現象。PVDF膜加入polybrene還能提高膜的親和性。
 
  實驗1:逆轉錄病毒感染(Retroviral Infection)
 
  (1)重組逆轉錄病毒原液的制備:取5ml生長培養基(5%血清)加入約含單層轉染逆轉錄包裝細胞的100mm培養盤內。孵育24h后,吸去培養液并用0.45μm濾器過濾。
 
  (2)待感染細胞的培養:100mm培養盤內加入10ml*培養基,細胞密度為5×105/盤。
 
  (3)病毒感染:細胞培養24h后,吸去*培養液。用含polybrene的2ml病毒上清 (或將病毒原液稀釋到2ml)感染細胞,polybrene的終濃度為5μg-10μg/ml。37℃孵育3-6h。
 
  (4)收集病毒顆粒:加入8ml*培養基。感染3天后,按照1:5的比例用選擇培養基裂解細胞。
 
  實驗2:轉染
 
  (1)*生長培養基培養細胞,培養細胞密度約50%;
 
  (2)孵育細胞18-24h后準備DNA-培養基- Polybrene混合液,按如下操作制備混合液:①添加*培養基(60mm培養皿2ml,100mm培養皿3ml),37℃預熱;②添加10ng~10µg質粒輕輕混勻;③加入Polybrene至終濃度為5μg-10μg/ml。輕輕混勻。以上每個成分需要按順序加入。
 
  (3)去除培養基,在細胞中加入DNA-培養基-Polybrene溶液,在37℃孵育細胞6-20h。細胞培養的前6h內約每1.5h輕柔混勻。
 
  (4)去除DNA-培養基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution(15%DMSO in 1X HBSS)輕輕蓋住細胞(60mm培養皿3ml,100mm培養皿4ml)。每次加入溶液時用手輕晃培養盤10s,使得液體均勻分布。然后37℃孵育細胞4min。
 
  (5)立即去除DMSO shock solution,用*生長培養基輕輕清洗細胞2次。對于60mm培養皿每次用5ml培養液清洗,100mm培養皿每次用10ml培養液清洗。
 
  (6)加入*培養基到細胞中;
 
  (7)穩定轉化:去除生長培養基,按照1:5的比例用選擇培養基裂解細胞。
 
  瞬時表達:去除生長培養基,加入新鮮的生長培養基。24-72h后收獲細胞。
  • © 2019 上海懋康生物科技有限公司 版權所有 技術支持:環保在線
  • 電 話:18616957973 傳 真:86-021-54736159 QQ號碼:1563822900 郵 箱:2971634497@qq.com 地 址:上海市閔行區虹梅南路2588號綠亮科創園1幢A棟321室
  • 備案號:滬ICP備16016464號-3 總訪問量:642412
在線客服 聯系方式

服務熱線

18616957973

主站蜘蛛池模板: 国产xxxxx| 久久性 | 中文字幕视频在线 | 亚洲爆乳无码一区二区三区 | 国产精品嫩草影院桃色 | 欧美丰满少妇人妻精品 | 伊人中文字幕 | 国产精品视频在线观看 | 在线视频亚洲 | 国产a久久麻豆入口 | 久久久天堂国产精品女人 | 免费成人深夜夜行p站 | 中文字幕在线观看免费 | 午夜精品视频在线观看 | 国产xxxxxx | 亚洲aⅴ | 精品一区二区三区在线观看 | 秋霞福利 | 天天射天天射 | 中文字幕日本 | www.久久久久 | 蜜桃av色偷偷av老熟女 | 免费三片在线观看网站v888 | 国产成人综合网 | 熟妇人妻中文av无码 | 亚洲做受高潮无遮挡 | 中文字幕国产精品 | 欧美高清 | 一区二区三区四区在线 | 无码精品人妻一区二区 | 夜夜骚av一区二区三区 | 欧美日韩一 | 日韩精品免费视频 | 国产精品无码一区 | 久久午夜夜伦鲁鲁一区二区 | 老司机午夜福利视频 | 青青草视频在线免费观看 | 极品美女高潮出白浆 | 国产调教| 欧美tv | 成人免费看片' | 亚洲精品一区二区三区蜜桃久 | 亚洲成av| 香蕉污视频 | 四虎精品| 日韩欧美国产精品 | 中文字幕av久久爽一区 | av三级 | 久久精品国产亚洲 | 亚洲激情视频 | 精品无码在线观看 | 国产精品无码一区二区三区免费 | 香蕉视频网站 | 亚洲天堂视频在线观看 | xxxx96| 日韩一级视频 | 亚洲精品成人无码 | 重囗另类bbwseⅹhd | 免费av在线播放 | 99re视频 | 伊人青青草 | 伊人一区| av不卡在线| 一边摸一边抽搐一进一出视频 | 免费网站观看www在线观 | 男女做爰猛烈叫床爽爽免费网站 | 丰满少妇一区二区三区 | 激情五月婷婷 | 欧美999| 日本精品视频 | 国产伦精品一区三区精东 | 日韩成人在线观看 | 一区二区三区久久 | 欧美xxxx18 | 国产一级黄色大片 | 欧美www | 国产一级在线观看 | 成人在线观看网站 | 91免费观看视频 | 国产a久久麻豆入口 | 一本色道久久综合狠狠躁 | 久久草视频 | 亚洲天天操 | 日韩av无码一区二区三区不卡 | 国产精品无码一区 | 国产在线第一页 | 911精品国产一区二区在线 | 中文字幕在线视频观看 | 黄色香蕉视频 | 美女久久 | 69视频在线观看 | 国精产品一区二区 | 操日本女人 | 欧美怡春院 | 国产精品一二三四区 | 91久久久久久久 | 中文字幕在线观看网站 | 亚洲天堂久久 | 粉嫩av |